总RNA提取试剂盒

  . 一步可获得高纯度RNA，无DNA残留

  . 适用于各种生物样本总RNA、miRNA的提取，包括动植物组织、血液、细胞、细菌等

    应用范围:

本产品适用于提取动、植物、昆虫、大型真菌等组织，细胞，细菌以及全血总RNA。可快捷、高效的制备高纯度总RNA。

   方法1：动、植物等组织总RNA提取

     1、样本处理

    （1）液氮研磨

   1.5ml 离心管中，提前加入500μl RL Solution备用；取25-100mg动、植物等组织，于研钵中（动物组织剪成小块，易于研磨），加入液氮充分研磨成粉，置于含有RL Solution的1.5ml离心管中，充分混匀，进入步骤2。

    （2）直接研磨

   取25-50mg组织，剪成小碎块，置于研钵或研磨器中，加入700μl RL Solution充分研磨(研磨不充分影响 提取效果)，吸取500μl 于1.5ml离心管中，进入步骤2。

  2、加入40μl 氯仿，充分混匀，12000g 4゜C离心10min。

3、小心吸取上清200-300μl于新的1.5ml 离心管中（避免吸入杂质），加入等体积无水乙醇，充分混匀。

      4、将混匀液吸入Spin column管中，12000g离心1min，弃 滤液。

      5、加入600μl Wash Buffer，12000g离心1min，弃滤液。

      6、重复步骤5。

7、小心取出Spin column（避免沾上滤出液），放入新的无RNA酶1.5ml 离心管中。

8、吸入50μl RNase free Water，室温放置1-2min后，12000g离心1min，收集滤液，获得总RNA。

     注意：

       1、组织破碎过程，采用液氮研磨，会有最佳提取效果。注意研磨充分。

       2、直接研磨法操作方便，但研磨不彻底时，会导致RNA一定程度降解。因此，样品

       处理要快速，研磨要充分。直接研磨处理时，注意样品量不多于50mg。

  3、样本保存：如需保存样本，步骤1后，暂时或长期存放于-20゜C（-80゜C更佳），待用时再提取，RNA可保存完好。

    方法2：细胞总RNA提取

1、离心收集细胞(5Ｘ10^2-8个)，弃上清（上清倒干净），加入500μl RL Solution，用枪头反复吹打细胞，直至全部细胞溶解，吸取全部裂解液于1.5ml离心管中，进入步骤2。

  2、加入40μl 氯仿，充分混匀，12000g 4゜C离心10min。

3、小心吸取上清200-300μl于新的1.5ml 离心管中（避免吸入杂质），加入等体积无水乙醇，充分混匀。

4、将混匀液吸入Spin column管中，12000g离心1min，弃滤液。

      5、加入600μl Wash Buffer，12000g离心1min，弃滤液。

      6、重复步骤5。

7、小心取出Spin column（避免沾上滤出液），放入新的无RNA酶1.5ml 离心管中。

8、吸入50μl RNase free Water，室温放置1-2min后，12000g离心1min，收集滤液，获得总RNA。

     注意：

        1、样本保存：如需保存样本，步骤1后，暂时或长期存放于-20゜C（-80゜C更佳），待用时再提取，RNA可保存完好。

     方法3：血液总RNA提取

1、取全血100μl于1.5ml 离心管中，加入500μl RL Solution充分混匀，进入步骤2。

  2、加入40μl 氯仿，充分混匀，12000g 4゜C离心10min。

3、小心吸取上清200-300μl于新的1.5ml 离心管中（避免吸入杂质），加入等体积无水乙醇，充分混匀。

4、将混匀液吸入Spin column管中，12000g离心1min，弃滤液。

      5、加入600μl Wash Buffer，12000g离心1min，弃滤液。

      6、重复步骤5。

7、小心取出Spin column（避免沾上滤出液），放入新的无RNA酶1.5ml 离心管中。

8、吸入50μl RNase free Water，室温放置1-2min后，12000g离心1min，收集滤液，获得总RNA。

      注意：

   1、全血样本：新鲜血液（抗凝或非抗凝）提取效果最佳。收集1滴（约50-100μl）新鲜血液，直接加入500μl RL Solution，枪头吸打充分

        混匀，进入步骤2；如果血滴已经凝固，则加入500μl RL Solution，枪头反复吸打至血块彻底溶解，进入提取步骤2。

   2、血液淋巴细胞RNA的提取: 收集血液淋巴细胞后，请按照方法2：细胞总RNA提取进行提取。

   3、样本保存：如需保存样本，步骤1后，暂时或长期存放于-20゜C（-80゜C更佳），待用时再提取，RNA可保存完好。

RNA提取试剂盒说明书.pdf