反转录试剂盒

. 高效M-MLV反转录酶：引进国外专利技术，增加了酶的稳定性和反转录保真性

. 过程简化，高效反转录

. 适用于各种生物样本单链RNA、mRNA或miRNA等的反转录

. miRNA cDNA第一链合成试剂盒：采用加尾法，所有miRNA加多聚A的尾巴；采用通用引物反转录miRNA为相应的cDNA，用于荧光定量PCR检测；反转录一次，即可检测所有miRNA的表达

产品介绍: 

本产品反转录酶M-MLV为重组表达获得，采用最新专利技术以RNA为模版，更高效反转录获得cDNA片段。

应用范围

1、cDNA第一链的合成

2、cDNA文库的构建

3、适用于二级结构复杂的RNA

产品成分（所有成分请置于－20゜C长期保存）

1、M-MLV Reverse Transcriptase （200 U/μl，20μl）

*使用时请置于冰盒内或冰上，避免室温长时间放置降低酶活

2、5×M-MLV Reverse Transcriptase Buffer（1mL）

3、dNTP Mixture（10mM each，30μl）

4、Random  6  mers （50μM，30μL）

5、Oligo dT15 Primer（50μM，30μL）

6、RNase Free Water（DEPC Water）

操作步骤

1、模板RNA在冰上解冻；引物、5×M-MLV Reverse Transcriptase Buffer、dNTP Mixture和RNase-free Water在室温（ 15-25℃） 条件下解冻， 解冻后迅速置于冰上。 使用前将每种溶液涡旋振荡混匀， 简短离心以收集残留在管壁的液体。

2、按照下表的体系在冰浴的无核酸酶的离心管中配制混合液：

组分                        体积

RNA                        1ng～2μg Total RNA

Primer                        1μL Random 6 Primer（50μM）或1μL Oligo dT15 Primer（50μLM）

dNTP（10mM）                1μL

5×Reverse Transcriptase Buffer 4μL

M-MLV Reverse Transcriptase 1μL

Rnase Free Water        补充至20μL

3、在PCR仪中42℃孵育60min，然后72℃加热5min终止反应，置于冰上进行后续实验或冷冻保存。

注意事项：

1、避免反复冻融样本RNA，刚制备的完整性好、 纯度高的RNA作为模版为最佳。

2、在使用Random Primer时，请注意随机引物量和总RNA量之间的关系，一般建议50 ng随机引物/5 μg总RNA。 当提高Random/RNA的比率将会提高短片段（～500 bp） cDNA的合成；而当降低Random/RNA的比率将会提高长片段cDNA的合成。

3、如果模板RNA富含二级结构， 可以先在65℃条件下预处理5 min。

4、如果反转录中使用PCR下游引物，为了防止引物错配导致的非特异扩增， 可以在50℃条件下进行反转录。

5、在进行长片段扩增时，建议70℃处理15 min灭活酶。

反转录试剂盒.pdf